采用赖氨酸肽链内切酶,消解样品,注入柱子进行纯化,进行只针对多肽的C-末端肽链片段的特异性分离提取,继之采用仅具N-末端测序功能的全自动蛋白/多肽序列仪对多肽测序,实现C-末端测序的要求。
对目的蛋白质或多肽采用赖氨酸肽链内切酶消解,将消解产物直接送入DITC柱内,分馏仪将自动的对其加热,将各多肽片段的N-末端的α-氨基酸和赖氨酸(Lys)残基的ε-氨基酸共价结合固定在DITC树脂上,用三氟乙酸(TFA)将固定住的各片段中的N-末端的肽链结合的α-氨基酸裂解,将释放出的C-末端片段收集。
收集的C-末端片段,不需要进一步纯化,即可采用N-末端测序功能的全自动蛋白/多肽序列仪对多肽进行测序,实现C-末端测序的要求。